CUT&Tag技術(shù)的核心是在Tn5上融合了protein A/G抗體結(jié)合功能域的轉(zhuǎn)座體pAG-Tn5。在進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先進(jìn)行靶蛋白特異性抗體（一抗）孵育，使抗體進(jìn)入細(xì)胞與靶蛋白結(jié)合。為了放大信號，同理接著進(jìn)行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5轉(zhuǎn)座體，使得轉(zhuǎn)座體進(jìn)入細(xì)胞并與抗體結(jié)合，這樣就把轉(zhuǎn)座體間接的固定在靶蛋白上，隨后激活Tn5酶的切割活性，切斷靶蛋白結(jié)合的DNA區(qū)域。由于Tn5連有測序接頭，在打斷的同時(shí)直接在片段化的DNA上加接頭，接著提取DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增構(gòu)建文庫。
盡管CUT&Tag與ChIP方法在某些方面類似，但CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的起始材料是活的可滲透細(xì)胞或分離的細(xì)胞核，而不是ChIP-seq中使用的甲醛交聯(lián)的細(xì)胞或組織。CUT&Tag有望將蛋白與染色質(zhì)DNA互作的研究變成了一種類似PCR反應(yīng)的常規(guī)操作，對基因調(diào)控、表觀遺傳等領(lǐng)域的研究具有重要的意義。
更好的信噪比和更低的背景；
樣本起始量低，測序通量高，單堿基分辨率；
檢測整個(gè)基因組中的蛋白質(zhì)/DNA結(jié)合和組蛋白修飾位點(diǎn)；
精確定位蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合位點(diǎn)；
靈敏度高，可以檢測細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有片段；
| 樣本類型 | 建議送樣量 | 存儲介質(zhì) | 保存、運(yùn)輸條件 |
| 新鮮細(xì)胞 | ＞30w | 有10%FBS的常用培養(yǎng)基 | 碎冰運(yùn)輸，冰袋運(yùn)送注意溫度勿過低導(dǎo)致懸液凍結(jié) |
| 凍存細(xì)胞 | ＞30w | 凍存液（10%DMSO，30%血清（FBS）培養(yǎng)基） | -80℃保存，干冰運(yùn)輸 |
| 動(dòng)物組織 | ＞30mg | / | -80℃保存，干冰運(yùn)輸 |
| 植物組織 | >500mg | / | 預(yù)冷的錫箔紙包裹儲存在-80°C，干冰運(yùn)輸 |
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