mRNA是在蛋白質(zhì)合成時(shí)充當(dāng)模板的RNA。mRNA-seq是為檢測(cè)mRNA表達(dá)發(fā)展出來(lái)的高通量測(cè)序技術(shù)。其技術(shù)原理,是對(duì)RNA中含有polyA尾的mRNA用oligo dT進(jìn)行富集。進(jìn)而對(duì)富集下來(lái)的mRNA進(jìn)行片測(cè)序。進(jìn)而對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析,從而獲得RNA中的基因表達(dá)、可變剪接、RNA編輯等信息。
樣本類(lèi)型 | 建議送樣量 | 存儲(chǔ)介質(zhì) | 保存、運(yùn)輸條件 |
組織 | >50mg | 1.RNA later; 2.存入凍存管; 3.大塊組織樣本不建議放入trizol保存; 4.1.5ml無(wú)菌離心管 | -80℃保存,干冰運(yùn)輸 |
細(xì)胞 | >2 x 10^6 | 1.收集的細(xì)胞沉淀,加入1ml trizol震蕩混勻-80度保存; 2.收集的細(xì)胞沉淀,液氮速凍5-10min,-80℃冰箱保存; | -80℃保存,干冰運(yùn)輸 |
全血 | >1ml | A.采用EDTA抗凝管采血,禁用肝素抗凝管,新鮮血液效果更佳。 B.或者分離出PBMC加 trizol 混勻。 C.或者全血離心去掉血漿加 trizol 混勻。 D.或者使用PAXgene Blood RNA Tube靜脈真空采血管(全血RNA管) PS:請(qǐng)盡量不使用RNA later保存全血。 | -80℃保存,干冰/4度(新鮮)運(yùn)輸 |
FFPE | A.切片組織面積大于1cm2,切片表面無(wú)劃痕,無(wú)干裂,均勻貼片的石蠟切片; B.切片組織細(xì)胞>30000個(gè);有核細(xì)胞比例>80%;腫瘤細(xì)胞比例>20%,白片厚度5~ 10um,需3-5片,組織面積偏小或細(xì)胞核占比未達(dá)80%以上,需提供5-12片; C.石蠟塊:厚度4mm以上,組織約綠豆大小以上; D.蠟卷:厚度25um左右,2-5卷 | / | 4℃或常溫保存和運(yùn)輸 |
RNA | >1ug | DEPC水;Water Nuclease-Free | -80℃保存,干冰運(yùn)輸 |