產(chǎn)品介紹

篩選目標(biāo)蛋白后在樣本中進(jìn)行驗(yàn)證的方法良多，常用方法有基于質(zhì)譜的PRM、基于抗體的蛋白質(zhì)免疫印記（western blot， WB）和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），另有其它方法，如免疫組織化學(xué)（通過化學(xué)反 應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定細(xì)胞內(nèi)蛋白定位、定性及相對(duì)定量信息），實(shí)時(shí)熒光定量PCR（通過測(cè)定基因相對(duì)含量 信息側(cè)面驗(yàn)證差異蛋白準(zhǔn)確性）。

Western Blot及ELISA依賴于抗原/抗體對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定量，然而很多蛋白都沒有成熟業(yè)化抗體，即使有抗體，也難以保證特異性及穩(wěn)定性，且單次實(shí)驗(yàn)通量低、成本高，由于以上弊端極大限制了蛋白組后期 的商驗(yàn)證工作?；谫|(zhì)譜的目標(biāo)蛋白檢測(cè)技術(shù)-PRM很好的克服了以上缺陷，無需抗體且單次可檢測(cè)多達(dá)幾十種蛋白。 平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)（PRM）是一種使用高分辨率質(zhì)譜儀（如Orbitrap Exploris 480）對(duì)目標(biāo)蛋白檢測(cè)的方法。在PRM中，肽段的前體離子被第一個(gè)四極桿質(zhì)量過濾器（Q1）分離出來，前體離子經(jīng)過C-Trap進(jìn)入多級(jí)離子通道，通過高能碰撞解 離將肽段離子的肽鍵隨機(jī)斷裂形成碎片離子，碎片離子隨后返回C-trap并被 Orbitrap采集質(zhì)荷比，從而得到目標(biāo)肽段二級(jí)譜圖。

PRM 靶向定量蛋白組工作流程

PRM靶向定量蛋白組工作流程較為復(fù)雜，大致分為以下步驟：1）根據(jù)生物學(xué)問題或臨床問題確定感興趣蛋白質(zhì)；2）對(duì) 實(shí)際檢測(cè)樣本蛋白質(zhì)混合液進(jìn)行DDA檢測(cè)，確定目標(biāo)蛋白肽段，并挑選unique肽段用于后期PRM檢測(cè)；3）建立目標(biāo)肽 段采集方法，包括前體離子m/z、肽段洗脫時(shí)間、儀器參數(shù)等；4）在待測(cè)樣本中進(jìn)行目標(biāo)肽段LC-MS/MS分析；5）對(duì)采 集后數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以確定目標(biāo)肽的身份，并根據(jù)提取的離子色譜圖（XIC）確定分析物豐度。