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RNA熒光原位雜交（ISH）

產(chǎn)品介紹

結(jié)果展示

送樣建議

技術(shù)原理
技術(shù)原理 SEERNA?ISH RNA熒光原位檢測(cè)是基于信號(hào)放大的單分子 RNA 熒光原位雜交技術(shù)，通過配對(duì)設(shè)計(jì)的 DNA 連接探針（DLPs）與靶標(biāo) RNA 分子互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，然后使用具有以RNA為模板進(jìn)行DNA連接能力的連接酶，進(jìn)行 DLPs 的第一步連接成半環(huán)；之后以互補(bǔ)的 DNA 為模板，在 Splint連接酶的作用下實(shí)現(xiàn) DLPs 的成環(huán)；隨后在 DNA 聚合酶的作用下，進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大；最后在滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物上，雜交帶有單個(gè)熒光基團(tuán)標(biāo)記的檢測(cè)探針，進(jìn)行熒光顯微拍照成像。
實(shí)驗(yàn)流程
（1）樣本前處理
冰凍樣本：切片退凍、固定、脫水和透化等，以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進(jìn)入； FFPE樣本：烤片、脫蠟、復(fù)水、固定、復(fù)性、透化和脫水等。 （2）探針雜交與滾環(huán)擴(kuò)增：探針與RNA雜交之后連接成環(huán)，通過滾環(huán)擴(kuò)增放大信號(hào)； （3）熒光成像：檢測(cè)探針攜帶特定熒光基團(tuán)，與靶標(biāo)基因雜交探針特異性結(jié)合，在顯微鏡下選擇合適的熒光濾塊和曝光時(shí)間進(jìn)行掃描成像，通過識(shí)別熒光信號(hào)確定該位置靶向結(jié)合的基因； （4）圖像分析：在組織圖像中標(biāo)記每個(gè)靶基因，可以進(jìn)行信號(hào)點(diǎn)計(jì)數(shù)分析。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
(1) 高效、特異、高敏
(2) 高信噪比
(3) 可實(shí)現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測(cè)
(4) 亞細(xì)胞分辨率
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
產(chǎn)品性能
- 單RNA分子檢測(cè)
- 探針設(shè)計(jì)特異性強(qiáng)
- 5~10對(duì)探針/靶標(biāo)、靈敏度高
- 信號(hào)放大、信噪比高
熒光通道
- DAPI 通道、GFP/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy7 通道均適用
- （Alexa Fluor 488/Cy3/Texas Red/Cy5/Alexa Fluor 750）
樣本和靶標(biāo)
靶標(biāo)：同時(shí)檢測(cè)1~4個(gè)靶標(biāo)RNA（mRNA、LncRNA、circRNA、可變剪切等）
樣本：細(xì)胞爬片、新鮮冰凍OCT包埋組織切片（FF）、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片和固定后冰凍組織切片
檢測(cè)結(jié)果展示
1. 細(xì)胞爬片
2. 新鮮冰凍OCT包埋組織切片（FF）
3. 福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片
4. 固定后冰凍組織切片